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Spinning disk per microscopia confocale
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| Andor Revolution 488 è un sistema costituito da componenti hardware e software che creano una completa soluzione per la microscopia confocale. L’estrema sensibilità del sistema permette di detectare i campioni biologici anche in condizioni di bassi livelli di luce e brevi tempi di esposizione, e di lavorare con campioni preparati con bassa concentrazione di fluorofori. |
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Andor Revolution 488 è un sistema per microscopia confocale con sorgente laser (Argon o DPSS) a 488 nm. Permette di ottenere immagini in fluorescenza, rapidamente e con elevata sensibilità, utilizzando Fluo dyes o GFP (Green Fluorescent Protein).
I Fluo dyes sono una famiglia di indicatori usati per monitorare i rapidi cambiamenti della concentrazione del calcio intracellulare ( Ca2+). Il monitoraggio dei cambiamenti della concentrazione del calcio intracellulare può essere utile per comprendere meglio i meccanismi di trasduzione del segnale e i pathways funzionali nei sistemi cellulari.
L’estrema sensibilità del Revolution 488 permette non solo l’acquisizione di immagini in condizioni di bassi livelli di luce e brevi tempi di esposizione del campione, ma anche di utilizzare minori concentrazioni dei fluorofori, consentendo cosi la propagazione dell’onda di calcio, senza interferenza rilevante da parte dei fluorofori stessi.
La GFP, proteina estratta da alcune meduse, è stata ingegnerizzata per essere usata come sonda nello studio delle funzioni intracellulari, dell’espressione delle proteine e per verificare l’esatta localizzazione e dinamica dei componenti cellulari. |
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 | Massima sensibilità derivante dalla combinazione di iXon EMCCD con CSU spinning disk
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| Veloce acquisizioni delle immagini ( circa 1000 al secondo) con perfetta sincronizzazione
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| Riduzione del photo bleaching e della fototossicità per le cellule
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| Minima interazione con gli eventi fisiologici grazie alla possibilità di ridurre la concentrazione di dyes o GFP
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| Sezionamento ottico con Piezo Z100 per imaging con GFP o dyes in 4D ( 3D + t ); circa 100 sezioni al secondo
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| Analisi e manipolazione dell’immagine tramite il iQ software. |
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| COMPONENTI DEL SISTEMA ANDOR REVOLUTION 488 | |
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iXon Camera
Andor iXon: la prima Electron Multiplying CCD disponibile in commercio per imaging digitale dinamico con un ampio range di applicazioni. Andor revolution 488 prevede l’utilizzo della camera DV885 (1002 x 1004 pixels; 8 µm pixel, operante a 35 MHz) e DV887BV (512 x 512 pixels; 16 µm pixel, back illuminated operante a 10 MHz).
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Laser Combiner Unit
Andor laser combiner (ALC) è un regolatore che controlla l’avvio dei laser a stato solido o a gas, a seconda delle necessità sperimentali. Attualmente Revolution 488 impiega la versione ad una sola lunghezza d’onda di ALC (ALC 201-S), ma entro la fine di dicembre sarà disponibile un multi-line combiner (ALC 401-A). Lo shutter ed il filtro tunabile (AOTF) possono essere manovrati tramite il IQ software.
Lunghezza d’onda/potenza (mW) disponibili con laser a stato solido sono: 405/50, 440/16, 488/20, 532/50, 561/20, 635/25.
Laser con caratteristiche differenti sia a stato solido che gas possono essere forniti su richiesta. |
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Laser Confocal Spinning Disk (CSU)
I due spinning disk ( CSU 10 e CSU 22 ) forniti da Yokogawa Electric Corporation rappresentano il cuore del sistema e sono ideali per imaging confocale ad alto contrasto o per cellule marcate con coloranti fluorescenti.
CSU 22 insieme alla iXon camera offre alta sensibilità e velocità, 30 immagini al secondo e una risoluzione 512 x 512 pixel. |
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Piezo Z100
Piezo Z 100 permette la ricostruzione del campione in 3D effettuando 100 sezionamenti al secondo con una risoluzione di 1 nm e un range di 100 µm . l’unità può contenere supporti da 3” x 1” e piastre Petri da 35 mm. Utilizzato in combinazione con iXon si possono ottenere 30 immagini al secondo. |
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Emission Wavelength Control
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Revolution usa un dicroico altamente ottimizzato e un filtro di emissione per minimizzare il rumore derivante da lunghezze d’onda indesiderate, migliorando cosi il rapporto segnale/rumore.
Con CSU 22 possono essere selezionati fino ad un massimo di tre filtri, oppure si può utilizzare un multi band filter. In protocolli di imaging multi lunghezza d’onda una rapida rotazione del porta filtri permette la giusta discriminazione dell’emissione.
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Precision Controller Box
Il precision control box (PCB) provvede a sincronizzare tutti i componenti del sistema Revolution, assicurando che iXon, ALC,e Piezo Z100 rimangano sempre in un preciso allineamento temporale minimizzando cosi i tempi di esposizione dei campioni e aumentando fortemente la qualità delle immagini acquisite. |
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